產(chǎn)氣莢膜梭菌是一類革蘭氏陽性(G+)產(chǎn)芽胞的厭氧性梭菌,廣泛分布于污水、土壤、食物、人畜糞便及腸道中,是人畜共患病原菌。已經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)該菌能產(chǎn)生15種外毒素,其中重要的致死性毒素有α、β、ε、ι 四種,按分泌毒素的類型可將該菌分為 A、B、C、D、E 五種。產(chǎn)氣莢膜梭菌是引發(fā)組織毒害感染(如人類氣性壞疽)和腸道疾病(如人類 D 型產(chǎn)氣莢膜梭菌食物中毒和家畜腸毒血癥)的重要因素。因此,有效的分離和鑒定產(chǎn)氣莢膜梭菌對人類健康有著重要意義。
有報道指出,大腸菌群作為水質(zhì)微生物學(xué)指標(biāo)是不可靠的,而產(chǎn)氣莢膜梭菌可作為一個水污染的指示菌。歐洲已將其作為水質(zhì)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充條款,WHO已在水質(zhì)檢測中將其作為水質(zhì)污染的微生物。產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量與水污染程度有一定的相關(guān)關(guān)系。我國《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 飲用天然礦泉水檢驗方法》GB8538—2016規(guī)定,天然礦泉水產(chǎn)品和水源水需檢測產(chǎn)氣莢膜梭菌。
目前,檢測產(chǎn)氣莢膜梭菌多采用培養(yǎng)基法和PCR法。HiMedia公司(微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)商)生產(chǎn)的M-CP平板——梭菌顯色培養(yǎng)基M1354(膜過濾法),根據(jù)Armon和Payment的配方而成。培養(yǎng)基中的胰蛋白?、酵母粉提供氮源營養(yǎng),蔗糖提供碳源營養(yǎng)。溴甲酚紫為pH指示劑。吲哚β-D-葡萄糖苷為β-D-葡糖苷酶或纖維二糖酶的顯色底物,二磷酸酚酞用于檢測酸性磷酸化酶。添加的D-環(huán)絲氨酸和多粘菌素B(FD153)抑制伴隨的其他菌群。厭氧環(huán)境也提供了進(jìn)一步的選擇性。當(dāng)黃色(纖維二糖酶陰性)菌落在暴露于氨煙30秒后變?yōu)槊倒寮t時,即可認(rèn)為是產(chǎn)氣莢膜梭菌。顏色鑒別有時是困難的,因此,可挑取典型菌落(黃變粉色)和非典型菌落(綠色或沒變色)進(jìn)行驗證。驗證試驗可通過硫還原、革蘭氏陽性、芽孢桿狀、無動力性、硝還原、明膠液化、乳糖發(fā)酵和其他生化試驗證實。實踐證明,采用快速膜過濾技術(shù)和顯色培養(yǎng)基(M-CP培養(yǎng)基),簡單、易行、可靠,HiMedia公司生產(chǎn)的M-CP培養(yǎng)基在上得到廣泛應(yīng)用,如 Raed S. Al-Wasify等人,用顯色介質(zhì)檢測水中某些病原菌的敏感性和特異性(Raed S. Al-Wasify, Al-Sayed A. Al-Sayed and Mohamed M. Kamel. Sensitivity and Specificity of Chromogenic Media for Detection of Some Pathogens in Water[J]. International Journal of Environment and Sustainability, 2013, 2(1): 1-9.)