維生素測定培養(yǎng)基是利用萊士曼氏乳酸桿菌對維生素的特異性和靈敏性,定量測定出試樣中維生素的含量。在測定用培養(yǎng)基中供給除維生素以外的所有營養(yǎng)成分,這樣萊士曼乳桿菌生長濃度(吸光度)就會同標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液及未知待測溶液中維生素的含量呈正比的線性關(guān)系。以不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的維生素含量為橫軸,以萊士曼乳桿菌生長濃度(吸光度)為縱軸,即可繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出試樣中維生素的含量。
維生素測定培養(yǎng)基的常見問題回答:
1.該測定培養(yǎng)基能用肉眼判斷其pH值嗎?
答:該測定培養(yǎng)基中酚紅的含量與普通培養(yǎng)基中的酚紅含量不同,不能通過肉眼觀察或通過經(jīng)驗(yàn)來判定pH值,建議使用pH計(jì)進(jìn)行測定。
2.什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅?
答:酚紅在培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。酚紅本身對生物制品質(zhì)量并不會產(chǎn)生影響,可以通過純化技術(shù)去除,但酚紅在無血清培養(yǎng)基可能帶來胞內(nèi)鈉/鉀失衡,影響細(xì)胞生長,當(dāng)然這種作用能被血清所中和或減輕。酚紅并不是培養(yǎng)基中必需的一種成分,很多國外的疫苗或抗體生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)過程中都使用無酚紅培養(yǎng)基。
3.谷氨酰胺溶液和碳酸氫鈉的配制方法是什么?
答:以0.2mol/L的L-谷氨酰胺配制為例:稱取L-谷氨酰胺2.92g,加注射用水100ml,充分?jǐn)嚢杌靹?。?.2μm濾膜正壓過濾除菌。溶液應(yīng)在4℃下避光保存,2周內(nèi)使用。
以7.5%NaHCO3的配制為例:稱取NaHCO37.5g溶于100ml蒸餾水中過濾除菌。
4.維生素測定培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)是什么?
答:平衡鹽一般是由無機(jī)鹽及葡萄糖組成的。平衡鹽有Hanks′系統(tǒng)、Earle′s系統(tǒng)、Dulbecco′s磷酸緩沖鹽系統(tǒng)等。