在微生物學和生物醫(yī)藥領域，菌落形成單位（CFU, Colony Forming Units）是一個常用的量化指標，用于評估微生物樣品中的活菌數量。CFU的測定通過稀釋、接種和培養(yǎng)微生物樣品，觀察形成的獨立菌落來實現。這一方法廣泛應用于水質監(jiān)測、食品安全檢測、生物制藥過程控制等多個領域。本文將詳細介紹CFU測定的實驗操作步驟。

實驗目的

本實驗旨在通過標準的微生物學方法，測定樣品中的CFU數量，從而評估樣品的微生物污染程度或活菌含量。

實驗材料

• 無菌培養(yǎng)皿

• 無菌試管

• 無菌吸管

• 無菌接種環(huán)

• 酒精燈

• 適當的培養(yǎng)基（如牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基）

• 待測樣品（如水樣、食品樣品等）

• 培養(yǎng)箱

• 顯微鏡、

• 菌落計數器

實驗步驟

1. 樣品準備：

• 根據樣品類型（固體或液體），進行適當處理。例如，對于固體樣品，進行均質化或研磨；對于液體樣品，進行振搖以混勻。

• 對樣品進行適當稀釋，以獲得適宜的接種濃度。一般使用滅菌生理鹽水作為稀釋液。

2. 稀釋與接種：

• 按照無菌操作規(guī)范，將樣品進行連續(xù)稀釋，通常選擇10倍系列稀釋。

• 使用無菌吸管吸取一定體積的稀釋液，接種到含有適當培養(yǎng)基的無菌培養(yǎng)皿中。每個稀釋度應接種多個培養(yǎng)皿以提高準確性。

• 將培養(yǎng)皿內的培養(yǎng)基與稀釋液充分混勻，可采用畫圓或回轉的方式，避免液體濺到培養(yǎng)皿邊緣。

3. 培養(yǎng)：

• 將接種后的培養(yǎng)皿倒置于培養(yǎng)箱中，設定適宜的溫度和濕度條件進行培養(yǎng)。培養(yǎng)時間根據微生物種類和生長速度而定，通常為24-48小時。

4. 菌落計數：

• 培養(yǎng)結束后，使用放大鏡或菌落計數器觀察并記錄每個培養(yǎng)皿上的菌落數量。

• 選擇菌落數在30-300之間的培養(yǎng)皿進行計數，這是為了保證計數的準確性和可靠性。如果菌落數過多或過少，可能需要調整稀釋度或重新進行實驗。

• 計算同一稀釋度下多個培養(yǎng)皿的平均菌落數，然后乘以稀釋倍數，得到每毫升（或每克）樣品中的CFU數量。

5. 數據處理與報告：

• 根據實驗結果，計算CFU的數值，并進行適當的統(tǒng)計分析。

• 報告結果時，應注明稀釋倍數、培養(yǎng)條件以及菌落計數的具體方法。

注意事項

• 在整個實驗過程中，必須嚴格遵守無菌操作規(guī)范，以防止污染。

• 培養(yǎng)基的種類和配方應根據待測微生物的種類和特性進行選擇。

• 接種時應確保稀釋液和培養(yǎng)基充分混勻，以避免菌落分布不均。

• 計數時應選擇無蔓延菌落生長的培養(yǎng)皿進行計數，如果平板上有大片菌落生長，則不宜采用該平板的計數結果。

結論

CFU的測定是一種簡單而有效的微生物計數方法，廣泛應用于各種微生物學研究和應用領域。通過標準的實驗操作步驟和嚴格的實驗條件控制，可以獲得準確可靠的CFU數值，為微生物污染程度的評估和生物制品的質量控制提供重要依據。