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胎牛血清正確解凍方法步驟詳解

更新時間:2024-04-19  |  點擊率:356

在解凍胎牛血清之前,需要做好準備工作。首先,應(yīng)確保實驗室環(huán)境清潔,避免污染,可以使用紫外線照射無菌工作臺和實驗空間,同時配合使用實驗室微生物污染祛除類試劑,比如德國Minerva Biolabs生產(chǎn)的Mycoplasma Off支原體祛除噴霧劑,對實驗室進行清潔,降低胎牛血清在解凍、分裝或使用過程中被污染的可能性。其次,準備好所需的實驗器材,如無菌移液管、無菌試管,并確保這些器材是嚴格無菌的。此外,還需檢查胎牛血清的包裝是否完好無損,如有破損或污染,則不應(yīng)使用。

 

胎牛血清這種混合物中,融化速度:蛋白質(zhì)等干物質(zhì)>水這類溶劑,所以蛋白質(zhì)會先溶解析出,而水還是結(jié)成冰的狀態(tài),導致瓶子中間會出現(xiàn)一根透明的冰柱,而周圍則會呈現(xiàn)上黃下紅的分層渾濁液的狀態(tài),在使用過程中很容易引起沉淀、混合不均勻、局部濃度過高等問題,影響細胞生長。

 

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更重要的一點是,血清中珍貴的生長因子等活性物質(zhì),它們在解凍過程中,有著與細胞復蘇類似的經(jīng)歷,都需要快速解凍才能很大程度地保留生物活性。顯然,4℃過夜這樣的長時間處理,很有可能會導致一部分「營養(yǎng)成分」的損失,影響細胞生長。因此,正確的解凍方法,應(yīng)該是盡可能讓胎牛血清所有成分同時融化。

 

我們推薦使用更科學“三步法"對胎牛血清進行解凍。根據(jù)待解凍的胎牛血清的量不同,按照下表中的建議時長與溫度對其進行處理。需要注意的是,如果血清是儲存在-80℃冰箱中,正式解凍前應(yīng)先轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱中過渡。


操作

溫度

100ml

500ml

1000ml

步驟一

室溫

35 min

90 min

100 min

或15-20℃水浴

5 min

18 min

20 min

步驟二

20℃水浴

15 min

25 min

30 min

步驟三

37℃水浴

20 min

35 min

45 min