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細胞培養(yǎng)指南,這個關(guān)鍵點千萬要注意!

更新時間:2023-10-14  |  點擊率:422

細胞培養(yǎng)實驗是一項基礎但十分重要的技術(shù)。幫助科研人員再生物學、醫(yī)學和藥物開發(fā)等領(lǐng)域,實現(xiàn)探索生物學機理、藥物篩選、開發(fā)治療方法等目的,并為基礎科學和臨床應用提供關(guān)鍵數(shù)據(jù),幫助于我們更深入地了解生命過程,推動醫(yī)學和生物科學領(lǐng)域的進步。

 

在細胞培養(yǎng)實驗中,除了可靠的實驗方案、嚴格無菌的環(huán)境以及規(guī)范合理的實驗操作,還有一個關(guān)鍵點,重要但容易被忽視——高品質(zhì)的實驗試劑?!扒蓩D難為無米之炊",實驗試劑選擇的好與壞,直接關(guān)系到實驗結(jié)果的成敗。其中,胎牛血清作為“細胞糧食"的主要提供者,在細胞培養(yǎng)中扮演著重要的角色。

 

胎牛血清提供對維持細胞指數(shù)生長的營養(yǎng)物;提供結(jié)合蛋白,來識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力;結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用;參與細胞貼壁;提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害;參與細胞凍存。

 

因此細胞實驗過程中,需要挑選高品質(zhì)的胎牛血清,來保障實驗能夠順利進行。在選擇胎牛血清時,有以下幾個注意事項:

 

1、胎牛血清的內(nèi)毒素含量

在挑選血清時,應關(guān)注內(nèi)毒素含量的高低。內(nèi)毒素含量高,容易引起細胞衰老、凋亡等情況,品質(zhì)高的的胎牛血清,內(nèi)毒素應該是非常低的。因此,內(nèi)毒素可作為胎牛血清等級評判標準之一,內(nèi)毒素含量越低的胎牛血清,級別就越高:

內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時,為特級胎牛血清;

內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時,為優(yōu)級胎牛血清;

內(nèi)毒素含量≥ 25EU/ml時,為標準級胎牛血清。

目前,由于同一廠家,不同批次的血清,內(nèi)毒素數(shù)值也可能有較大差異,因此很多血清廠家在名稱上已不注明級別。但使用者仍可通過檢測報告,自行甄別挑選。

 

2、胎牛血清的血源

澳洲作為無疫產(chǎn)區(qū),環(huán)境更為純凈,抗生素等藥物的使用管理也較為嚴格,因此,澳洲血源的胎牛血清,更受科研人員的偏愛。

合格的胎牛血清通常來自符合當?shù)匦竽敛块T相關(guān)規(guī)定的的養(yǎng)殖場和屠宰場,采用非侵入性或較小侵入性的采集方法。這樣可以盡可能維持血源的潔凈度,減少外部污染物的影響。

 

3、胎牛血清應通過病原相關(guān)檢測

細胞培養(yǎng)的成功與安全性密切相關(guān),而工藝精良的胎牛血清生產(chǎn)技術(shù),可以在生產(chǎn)層面,避免胎牛血清被各類病原微生物污染。在選擇胎牛血清時,科研人員往往無法直接進入生產(chǎn)廠家,了解具體的生產(chǎn)過程,因此,應重點關(guān)注檢測報告中的“無菌檢測"、“病毒檢測"“病毒抗體"等相關(guān)項目,選擇無病原污染的的胎牛血清。

 

以科研人員常用的,Ausbian進口特級胎牛血清為例。該品牌的胎牛血清為澳洲血源,生產(chǎn)過程經(jīng)過7次無菌過濾,最后3次為0.1μm濾膜無菌過濾。

為了最終驗證胎牛血清的無菌性,Ausbian進口特級胎牛血清還經(jīng)過嚴格的病原體檢測,在供應商提供的檢測報告中,涉及有關(guān)病毒、細菌、真菌和支原體等,病原體和微生物的篩查檢測項目,檢測結(jié)果均為“未檢出",相應病毒的抗體檢測各類蛋白也應呈現(xiàn)“未檢出"的結(jié)果,確保胎牛血清的無菌性。另外,Ausbian進口特級胎牛血清的內(nèi)毒素含量也非常低,控制在3EU/ml以下,有些批次甚至 ≤ 1EU/mL,讓細胞更加健康地生長繁殖。

4、胎牛血清的蛋白含量

總蛋白含量:胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,可能說明采血的牛齡偏大,不是胎牛;數(shù)值偏低,表明血清可能摻入水或者其他溶劑。

血紅蛋白含量:標準為不高于20mg/dl。

免疫球蛋白:免疫球蛋白的數(shù)值能側(cè)面反映出采血的時的牛齡情況,新生牛血清中容易檢出IgM,IgG的含量也偏高,胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也較低。

需要注意的是,在檢測規(guī)范允許的范圍內(nèi),同一品牌,不同批次的胎牛血清,各類蛋白含量可能略有差異,如果實驗中,對某些蛋白有特殊的需求,需要關(guān)注胎牛血清的檢測報告,對不同批次的血清進行選擇。

 

因此盡量選擇能提供多批次平行試用的品牌,經(jīng)過對比篩選,Ausbian進口特級胎牛血清脫穎而出。同時儲備多個批次,供使用人員試用,選擇更適合自身實驗需求的胎牛血清,試用結(jié)果滿意再進行大批量訂購,更加省時省力省心。

 


 

綜上所述,在選擇胎牛血清時,應重點關(guān)注胎牛血清的內(nèi)毒素含量、血源、無菌及病原檢測、蛋白含量等指標,選擇更適合自身細胞實驗的產(chǎn)品。