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提高細(xì)胞培養(yǎng)效率的兩個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)

更新時(shí)間:2023-09-25  |  點(diǎn)擊率:486

細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用,是人類開啟生命奧秘大門的鑰匙。該項(xiàng)技術(shù)的發(fā)展,科學(xué)家們能夠脫離供體的情況下,在實(shí)驗(yàn)室中,研究并分析各種細(xì)胞的生命活動(dòng)。高效的細(xì)胞培養(yǎng)來之不易,操作過程的實(shí)際情況十分復(fù)雜,存在諸多可能會(huì)影響培養(yǎng)效率的因素,包括實(shí)驗(yàn)環(huán)境、實(shí)驗(yàn)材料的選擇等。

 

一、實(shí)驗(yàn)環(huán)境

 

細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境需要嚴(yán)格無菌,甚至是空氣都要使用新風(fēng)系統(tǒng)進(jìn)行過濾。對(duì)于墻壁、地板、桌面、超凈工作臺(tái),更是要定期清潔。德國Minerva Biolabs公司的Mycoplasma-off™ WipesMycoplasma-off™直接用于實(shí)驗(yàn)環(huán)境、物品、儀器、設(shè)備的清潔。該試劑無需稀釋,噴灑或擦拭后自然風(fēng)干,即可高效清除環(huán)境中的微生物污染。

 

細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中,培養(yǎng)箱水槽,水浴鍋經(jīng)常會(huì)有支原體以及各種細(xì)菌、霉菌滋生,稍有不慎或清洗不及時(shí),水槽中的水源即會(huì)成為細(xì)胞污染的重要來源。保持水槽的潔凈,對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的順利進(jìn)行非常重要。推薦:全球眾多實(shí)驗(yàn)室日常都在使用德國MB公司生產(chǎn)的Water Shield™支原體污染防護(hù)劑(水槽用)。Water Shield™可持續(xù)作用四周,使水源避免受到支原體、細(xì)菌、真菌、霉菌、孢子的污染。1:200的比例,加到水浴鍋或培養(yǎng)箱水盤的無菌水中即可

 

二、實(shí)驗(yàn)材料的選擇

 

所培養(yǎng)的細(xì)胞,來源應(yīng)清晰,確保無污染。對(duì)于培養(yǎng)試劑及耗材,也盡可能選擇無菌的。

 

細(xì)胞離不開高品質(zhì)血清。而胎牛血清作為天然的培養(yǎng)基,在培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中占有重要位置。選擇胎牛血清的重要指標(biāo)之一,就是考察內(nèi)毒素的含量。

內(nèi)毒素在細(xì)胞傳代增殖過程中,會(huì)直接參與細(xì)胞凋亡的過程,一定劑量下,會(huì)給細(xì)胞培養(yǎng)帶來很多問題,特別是免疫細(xì)胞和干細(xì)胞,例如:誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細(xì)胞集落的形成等。因此,血清中內(nèi)毒素含量越低,對(duì)細(xì)胞毒性越小,越利于細(xì)胞的生長和傳代;反之,內(nèi)毒素含量過高,會(huì)直接導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不良,提前老化,甚至死亡。

 

基于以上研究,用于細(xì)胞培養(yǎng)的牛血清,要通過嚴(yán)格的內(nèi)毒素水平檢測,每一批血清都有完整的檢測報(bào)告,通過內(nèi)毒素的檢測數(shù)值,對(duì)血清的品質(zhì)進(jìn)行分級(jí)和評(píng)估。

 

目前國際通用的分級(jí)方法,均以內(nèi)毒素含量的高低來確定,內(nèi)毒素含量越低,血清的級(jí)別就越高,以胎牛血清為例:

當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時(shí),此血清為特級(jí)胎牛血清;

當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml≤ 25EU/ml時(shí),此血清為優(yōu)級(jí)胎牛血清;

當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≥25EU/ml時(shí),此血清為標(biāo)準(zhǔn)級(jí)胎牛血清;

 

Ausbian®進(jìn)口特級(jí)胎牛血清,澳洲血源,均經(jīng)過嚴(yán)格篩選, 目前所有批次內(nèi)毒素都低于3EU/ml,其中有的批次可以低至≤1EU/ml。更低的內(nèi)毒素血清,更利于細(xì)胞的生長和傳代。