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細胞培養(yǎng)中常見的『液體試劑』

更新時間:2023-03-18  |  點擊率:860

細胞的體外培養(yǎng)技術(shù),是細胞生物學(xué)的一項基本實驗。了解細胞培養(yǎng)的目的、實驗材料、實驗步驟等知識,有利于培養(yǎng)出更健康的細胞,更好地應(yīng)用于科學(xué)實驗中。

本期內(nèi)容,我們來探討細胞培養(yǎng)過程中,常見的液體試劑。

培養(yǎng)基是細胞賴以生存的液體環(huán)境的提供者,人工模擬細胞在體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境,為細胞營養(yǎng)、促進細胞生長增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。

基礎(chǔ)培養(yǎng)基是水、無機鹽、碳水化合物、維生素、氨基酸等成分的混合溶液。一般情況下,會通過補加血清或是各類不同等成分,配制為適合不同細胞生長繁殖的培養(yǎng)基。實驗中,可以通過ATCC查詢所培養(yǎng)的細胞適合什么類型的培養(yǎng)基,配制比例是多少。

培養(yǎng)基可以是粉劑或液體,英文均為medium。

培養(yǎng)基有助于保持培養(yǎng)體系中的pH值和滲透壓平衡,是控適宜細胞生長的重要且復(fù)雜的因素。

對于一些培養(yǎng)難度較大的細胞,選擇一款能夠與細胞“契合"的培養(yǎng)基,有利于維持細胞實驗結(jié)果的穩(wěn)定。另外,培養(yǎng)基使用的便捷程度,也是不可忽視的一個方面。

Ausbian干細胞培養(yǎng)基,是在含微量胎牛血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,通過添加一種人永生化干細胞系的條件培養(yǎng)基混合組成,是一款即用型培養(yǎng)基。解凍后即可參與干細胞培養(yǎng),無需二次配制,方便快捷且高效。

根據(jù)供體動物或采血時間的差異,血清分為許多種類。用于動物細胞培養(yǎng)的血清主要有牛血清、馬血清、豬血清等。其中,牛血清的使用更為廣泛,胎牛血清憑借其豐富的營養(yǎng),支持多種細胞生長繁殖的特性,深受科研人員喜愛。

合格的胎牛血清,應(yīng)采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血,內(nèi)毒素含量也應(yīng)嚴格控制,過高的內(nèi)毒素會導(dǎo)致細胞提前衰老、凋亡,細胞狀態(tài)變差,相應(yīng)的實驗結(jié)果也容易產(chǎn)生波動。

Ausbian進口特級胎牛血清,采自5-8月齡牛胚胎,澳洲血源,出廠前均經(jīng)過嚴格質(zhì)控,并附詳細《檢測報告》,內(nèi)毒素含量≤3EU/ml,盡可能降低內(nèi)毒素對細胞的影響,為細胞創(chuàng)造一個健康的生長環(huán)境,有利于實驗的穩(wěn)定。

在無菌的理想狀態(tài)下,是沒有必要添加抗生素的。但由于實驗環(huán)境在實際中沒要辦法做到真正的無菌,所以很多科研人員會“習(xí)慣性、預(yù)防性"地添加抗生素。

但事實上,抗生素并不是「免死金牌」,真菌、支原體這些污染是它不能夠?qū)沟模踔翞E用還會適得其反。

一些文獻中表明:β-內(nèi)酰胺類抗生素及氨基糖甙類抗生素,對真核細胞培養(yǎng)有抑制增殖作用,在原代細胞和干細胞等難養(yǎng)細胞上尤其明顯。有研究人員發(fā)現(xiàn),抗生素(雙抗:青霉素和鏈霉素)的使用影響人體肝細胞中基因表達與基因調(diào)控。

雖然抗生素對真核細胞生長的影響機制至今尚未明確,但是為了細胞更好的生長,實驗結(jié)果更加準確和穩(wěn)定,在實驗過程中盡量不要隨意使用。實驗室的環(huán)境衛(wèi)生需要精心維護。

定期清潔、規(guī)范操作都是盡量避免實驗污染的好方法。德國MB公司的支原體污染祛除試劑

細胞培養(yǎng)中,還可能會用到一些其他液體試劑。

比如用于細胞消化的胰酶,也叫細胞消化液體。常用的胰酶溶液是0.25% 、0.125%的胰蛋白酶與0.02%的二乙胺四乙酸二鈉(EDTA) 調(diào)配的溶液。該消化液可以使細胞脫離粘附表面,形成單個細胞。

酚紅指示劑,一種用于指示pH溶液,中性為紅色,酸性為黃色,堿性為紫色。但并不是所有培養(yǎng)基都要添加酚紅,應(yīng)根據(jù)細胞種類、實驗?zāi)康脑贈Q定

HEPES,細胞培養(yǎng)中很常見的一種Buffer;谷氨酰胺,可以作為細胞的能量來源,參與蛋白質(zhì)的合成和能量代謝。但谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,應(yīng)在-20 ℃冰凍保存,添加到液體培養(yǎng)基后,在4℃保存,不要超過1周。