今天我們書接上回,接著講講另外3個關鍵點。
公共設備可能存在問題
儀器的參數(shù)
也會影響細胞狀態(tài)
如果細胞不存在污染,培養(yǎng)體系沒有瑕疵、細胞初始狀態(tài)也沒有問題,那么可以考慮公共儀器設備是否存在紕漏。
常見有水浴鍋溫度、室內(nèi)溫度及濕度、培養(yǎng)箱參數(shù)、水浴鍋溫度等。
水浴鍋是細胞培養(yǎng)室常用的儀器,要定期用溫度計對其工作溫度進行檢查,觀察是否存在溫度不準、溫度驟變的情況。另外要強調(diào)一點,水浴鍋也是常見的污染源之一,水浴鍋中的水最好使用無菌水,并定期做好清潔工作,推薦大家使用MB WaterShield,可以有效清除、預防水槽中的支原體,方便安全、省時省力省心。
細胞實驗室的溫度及濕度:儀器還是操作對溫度沒有特殊要求,維持舒適的溫度即可,比如18~26℃;過高的濕度會導致微生物的滋生,所以建議正常維持濕度在70%以下。應定期用溫度濕度測試儀對細胞實驗室進行檢測,以防溫控系統(tǒng)出現(xiàn)故障。
培養(yǎng)箱參數(shù):一般哺乳類與禽類細胞在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃;大多數(shù)細胞適宜的pH范圍往往是7.2~7.4。在開放式培養(yǎng)中,以5%的二氧化碳氣體比例為宜。但在實際操作過程中,細胞培養(yǎng)箱有可能會出現(xiàn)以下故障,影響細胞培養(yǎng)體系,進而使細胞生長變得緩慢:
溫度和溫度設定不準;
細胞培養(yǎng)箱濕度不能維持;
細胞培養(yǎng)箱的二氧化碳濃度不準。
對應解決方法給大家整理好,建議大家保存,以備不時之需。
實驗人員可能發(fā)生變化
細胞“飼養(yǎng)員”的更換
也可能影響細胞生長速率
作為一名合格的細胞“飼養(yǎng)員”,一定要預先了解所養(yǎng)細胞的“習性”:用哪種培養(yǎng)法、使用何種類型培養(yǎng)體系(血清種類、基礎培養(yǎng)基類型、是否添加生長因子以及抗生素等),盡可能還原初始的培養(yǎng)環(huán)境,讓細胞有個適應的過程。另外,實驗者自身也要注意操作規(guī)范,按照標準流程培養(yǎng)。
實驗試劑可能發(fā)生改變
培養(yǎng)用的試劑
也可能會是影響因素
不同品牌的試劑可能會有些許差別,對于一些比較嬌貴的的細胞,這些細微的差別很可能會導致細胞生長受到影響。因此我們一直強調(diào)大家“追本溯源”,盡可能用與原來一致的培養(yǎng)條件。
如果要更換試劑,建議大家先做個對照試驗,看看新的試劑對細胞生長有沒有影響。
另外,除了以上這六點,還有一點需要特別注意,就是:
細胞的代次
一般來說,細胞傳代次數(shù)是一定的(一些癌細胞系屬于特例),特別是像間充質(zhì)干細胞這類對代次比較敏感的細胞,需要格外注意,傳代次數(shù)過高后(10-15代左右),細胞生長速率也會明顯減慢。在實驗時,盡量選擇代次較低且狀態(tài)穩(wěn)定的細胞。