在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,病原污染可以算得上是科研工作者的噩夢了。其中支原體污染更像是一個無形的殺手,時刻威脅著細(xì)胞的安全。
細(xì)菌真菌污染還有跡可循,起碼顯微鏡下能夠清晰地看到,但是支原體個子小,不易觀察,由于繁殖速度比較慢,前期感染幾乎沒有癥狀。經(jīng)常稍不留意,就中了支原體的「陰招」。統(tǒng)計顯示,全球大約有60%左右的細(xì)胞培養(yǎng)存在或曾經(jīng)存在過支原體污染。
那到底如何判斷細(xì)胞究竟有沒有感染支原體?今天我們就來從原理上深扒一下,網(wǎng)傳的肉眼判斷是否感染支原體大法到底正不正確!
支原體感染癥狀1:細(xì)胞生長緩慢甚至死亡?
被廣泛使用的細(xì)胞培養(yǎng)基,不僅給細(xì)胞提供支持和養(yǎng)分,對于支原體而言,也是天堂一般的存在。
適宜的溫度(37℃)
合適的PH(7-8之間都可生存)
充足的養(yǎng)分(各種氨基酸、生長因子等)
一定的二氧化碳(5%左右)
與細(xì)胞培養(yǎng)高度重合的培養(yǎng)條件,注定了支原體要與細(xì)胞共同競爭有限的生存資源。
早有研究表明[1],一些支原體(包括最為常見的人型支原體、發(fā)酵支原體、精氨酸支原體等),通過精氨酸脫亞胺酶分解精氨酸來供能。當(dāng)這些支原體混入細(xì)胞培養(yǎng)體系后,會與細(xì)胞爭搶精氨酸,導(dǎo)致細(xì)胞「吃不飽飯」,出現(xiàn)營養(yǎng)不良的癥狀:生長速率異常、活力下降、易脫壁等等。
如果你培養(yǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)以下情況,基本可以確定是支原體感染了,不放心的話可以再配合支原體檢測試劑(檢測神器幫你揪出培養(yǎng)基中的支原體?。┻M(jìn)一步確認(rèn)。
細(xì)胞被支原體污染后的表現(xiàn)
①細(xì)胞生長緩慢
②細(xì)胞變形
③培養(yǎng)基中碎片增加
④細(xì)胞易聚團(tuán)
⑤鏡下觀察有小黑點(diǎn)
⑥培養(yǎng)基提前變色
除了影響細(xì)胞活力,支原體還會給細(xì)胞帶來的幾百種基因表達(dá)的改變,包括編碼受體、離子通道、生長因子的基因和癌基因等方面[4]。它包含高度富含免疫原性的脂蛋白,可以錨定在胞膜的外表面,被TLR2等免疫細(xì)胞的受體識別。激活NF-kB途徑,進(jìn)一步導(dǎo)致細(xì)胞活化[5],偏離最終的實驗結(jié)果。
支原體DNA抽提Kit特點(diǎn)及操作步驟
特點(diǎn)
1.符合歐洲藥典的要求。
2.從細(xì)胞上清和生物制品中,均可分離支原體DNA,全程只需30分鐘。
3.洗脫DNA純度高,體積50μl,保證PCR最大的靈敏。
操作步驟
試劑盒組分
Spin columns(核酸純化?。?、Collection tubes(收集管)、Conditioner液、Binding Buffer E液、Buffer A1液、Buffer A2液、Buffer E液
儲存條件
室溫