在細胞培養(yǎng)實驗中,血清無疑成為影響實驗成功與否的重要因素,而在眾多血清之中,牛血清是最為常用的。牛血清是細胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基,其中含有豐富的細胞生長所必須的營養(yǎng)成分,常用于動物細胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。牛血清是一種成分復雜的混合物,而且血清的組成及含量通常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而存在差異。牛血清主要成分有蛋白質(zhì),多肽類,激素類,其他成分 如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。
哪些情況下,要對血清內(nèi)毒素應格外留意篩選
1.養(yǎng)干細胞時,干細胞對內(nèi)毒素非常敏感,如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時,干細胞很容易死亡。很多使用者,在血清在試用前,就通過提早審核該批次《檢測報告》,以決定是否入圍進行試用。
2.養(yǎng)免疫細胞時,過高的內(nèi)毒素可誘導免疫細胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細胞集落的形成等。
3.基因敲除相關的細胞實驗,培養(yǎng)的細胞要盡可能保持其原始狀態(tài),任何引導細胞衰老或凋亡的試劑,都會讓后續(xù)的實驗結(jié)果“失之毫厘,謬以千里”。在準備血清和其他試劑時,選擇極低的內(nèi)毒素(最好≤1EU/ml),對實驗至關重要;
4.原代培養(yǎng)、雜交瘤融合、細胞轉(zhuǎn)染,或者肝細胞、神經(jīng)細胞、內(nèi)皮等難養(yǎng)細胞的擴增,這些都需要挑選好的血清給細胞以有力支持。因此,挑選更低的內(nèi)毒素,是保證實驗順利的第一步。
5.實驗室有些細胞,需要長期培養(yǎng)、長期凍存,或者經(jīng)常復蘇、經(jīng)常培養(yǎng)的,血清會經(jīng)?;蜷L時間作用于細胞。為保證細胞的健康,都應該選用更低內(nèi)毒素的血清,以避免內(nèi)毒素長久對細胞的毒性影響。
總之,血清中內(nèi)毒素含量過高,更容易導致細胞“亞健康”,造成數(shù)據(jù)不準,或細胞狀態(tài)不良、老化、甚至死亡,導致試驗中斷失敗。血清中的內(nèi)毒素越低越好。
細胞培養(yǎng)學會均依據(jù)內(nèi)毒素對血清的品質(zhì)進行分級和命名。
Ausbian®特級胎牛血清所有血清出廠前,均經(jīng)過嚴格質(zhì)控,每個批次附有詳細完整的《檢測報告》,包括:品名,貨號,批號,血源地,生產(chǎn)日期,保質(zhì)期,pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內(nèi)毒素、無菌檢查(細菌、真菌、支原體)、病毒檢查(如BVD、牛腺病毒、細胞病變效應等)、促細胞生長能力、細胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。
實驗人對于新批次血清,應認真審閱《檢測報告》,做好試用前篩選第一步。(如何看懂《檢測報告》,可登陸“締一生物”網(wǎng)站,留言技術部,得到免費幫助。)
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