支原體對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重的危害,同時(shí),它的發(fā)生率較高,肉眼不易察覺(jué)。
有報(bào)道,在細(xì)胞培養(yǎng)室中,它的平均發(fā)生率甚至可高達(dá)63%。在生物制品中,它的發(fā)生率為1%~3%。
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體的來(lái)源
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,污染細(xì)胞的支原體主要有5個(gè)方面的可能來(lái)源:
環(huán)境
被污染的細(xì)胞
人體表面的攜帶(如口腔、鼻腔、皮膚等)
實(shí)驗(yàn)試劑,如培養(yǎng)基、胰酶等
未*消毒的實(shí)驗(yàn)器具
其中,環(huán)境是造成支原體污染的一個(gè)主要原因。
特別是多人培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)共用同一培養(yǎng)箱、同一操作臺(tái),即使其中一個(gè)人很注意,但如果其他實(shí)驗(yàn)者給環(huán)境中帶進(jìn)支原體,以及培養(yǎng)箱箱門打開(kāi)頻繁,也會(huì)顯著增加細(xì)胞中出現(xiàn)支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)。因此環(huán)境預(yù)防遠(yuǎn)比在培養(yǎng)液中加入抗支原體藥物重要。
處理細(xì)胞培養(yǎng)工作區(qū)域的支原體
這里的工作區(qū)域包括實(shí)驗(yàn)臺(tái)、超凈臺(tái)、培養(yǎng)箱(水槽除外)、液氮罐、移液器、門把手等細(xì)胞培養(yǎng)的環(huán)境。
使用德國(guó)MB公司生產(chǎn)的支原體祛除噴霧或濕巾(品名:Mycoplasma-off™),可在5-10分鐘清除支原體,高效快速,操作方便。
產(chǎn)品特點(diǎn)及原理:
1)快速有效
噴霧劑和濕巾中含有支原體專用殺除劑Mynox®,可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體。
與傳統(tǒng)的化學(xué)試劑熏蒸方法相比,更加安全;與傳統(tǒng)酒精處理、紫外線照射方法相比更有效!
2)廣譜抗菌
不僅能根chu支原體,而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。
3)無(wú)腐蝕性和致癌性
乙醇作為溶劑,無(wú)腐蝕性和致癌性成分。
4)操作簡(jiǎn)便
即用型消毒液,可以快速簡(jiǎn)單地保持工作區(qū)的清潔干凈。
使用方法及步驟:
噴霧劑:
注:對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)箱,內(nèi)部噴灑支原體祛除噴霧或用濕巾擦拭后,應(yīng)打開(kāi)箱門通風(fēng)至少1小時(shí)。如培養(yǎng)箱帶熱滅活功能,可開(kāi)啟該功能以替代風(fēng)干。
濕巾:
對(duì)于移液器,門把手,電子設(shè)備等,可使用支原體祛除濕巾。擦拭后,應(yīng)讓其被消毒物體的表面保持濕潤(rùn),再讓其自然風(fēng)干。
培養(yǎng)箱水槽和水浴鍋中預(yù)防支原體污染的方法
細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中,培養(yǎng)箱水槽、水浴鍋經(jīng)常會(huì)有支原體以及各種細(xì)菌、霉菌滋生,稍有不慎或清洗不及時(shí),水槽中的水源即會(huì)成為細(xì)胞污染的重要來(lái)源。
保持水槽的潔凈,對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的順利進(jìn)行非常重要。
推薦眾多實(shí)驗(yàn)室日常都在使用德國(guó)MB公司生產(chǎn)的Water Shield支原體污染防護(hù)劑(水槽用)。Water Shield可持續(xù)作用四周,使水源避免受到支原體、細(xì)菌、酵母、霉菌和孢子的污染。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1)長(zhǎng)效。Water Shield含表面活性劑、季銨鹽和絡(luò)合劑,不易揮發(fā),可持續(xù)作用4周。
2)安全。不含醛類或疊氮化物,對(duì)細(xì)胞無(wú)毒害。
3)廣譜。預(yù)防支原體、細(xì)菌、酵母菌、霉菌和孢子污染。
4)方便。Water Shield按1:200比例,直接加入水中,使用方便。
5)不產(chǎn)生水垢。
操作步驟:
1)Water Shield和蒸餾水可直接加入培養(yǎng)箱水槽或水浴鍋中。
2)Water Shield按1:200比例使用,例如:1000ml蒸餾水+5ml Water Shield,或10L蒸餾水+50ml Water Shield。
3)4周左右清洗水槽,換水,重新加入Water Shield。
注意事項(xiàng):
避免吸入。眼睛接觸或長(zhǎng)時(shí)間皮膚接觸可能會(huì)產(chǎn)生刺激性。因而,使用試劑時(shí)應(yīng)戴上護(hù)目鏡和一次性手套。一旦皮膚接觸,應(yīng)用大量水沖洗。
Water Shield對(duì)玻璃、陶瓷、塑料、橡膠、鋼制品、貴金屬和其他金屬安全性良好。