葉酸測(cè)定培養(yǎng)基用于樣品中葉酸測(cè)定,是利用干酪乳桿菌對(duì)樣品中的葉酸含量進(jìn)行微生物法測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過(guò)程中使用的溶劑、容器必須確保無(wú)葉酸殘留;葉酸貯備液存于棕色瓶中,于2℃-4℃冰箱可保存2年,中間液可保存1年,標(biāo)準(zhǔn)工作液臨用前配制。
葉酸是鼠李糖乳桿菌生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)素,在一定控制條件下,將鼠李糖乳桿菌液接種至含有式樣液的培養(yǎng)液中,培養(yǎng)一段時(shí)間后測(cè)定透光率(或吸光度值),根據(jù)葉酸含量與透光率(或吸光度值)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出試樣中葉酸的含量。
葉酸測(cè)定培養(yǎng)基在使用時(shí)需注意下面這些事項(xiàng):
1.本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682規(guī)定的二級(jí)水。水的潔凈程度對(duì)本試驗(yàn)至關(guān)重要,若水中有葉酸殘留或接觸了有葉酸殘留的容器,將直接影響到試驗(yàn)結(jié)果;
2.試驗(yàn)中使用的玻璃器具需洗凈后在200℃烘至少2h,必要時(shí)可預(yù)先用1mol/L的稀鹽酸浸泡再烘,充分去除容器中可能殘留的葉酸;
3.使用的葉酸培養(yǎng)基需確保不含有葉酸,其他營(yíng)養(yǎng)齊全。若自行配制培養(yǎng)基,需確保原材料中不含有葉酸,制備過(guò)程不可污染葉酸。
葉酸測(cè)定培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備:
(1)葉酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液(20.0 μg /mL):精確稱(chēng)取20.0mg葉酸標(biāo)準(zhǔn)品,用氫氧化鈉乙醇溶液溶解轉(zhuǎn)移至1000mL棕色容量瓶中,定容至刻度。
?。?)葉酸中間液(0.200ug/mL):用氫氧化鈉乙醇溶解將1.0mL葉酸貯備液定容至100mL棕色容量瓶。
(3)葉酸標(biāo)準(zhǔn)工作液(0.200 ng/mL):用水將1.0mL葉酸中間液定容至1000mL容量瓶。