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解讀:『血清融化三步法——讓血清更好用』背后的秘密原理!

更新時間:2020-06-04  |  點擊率:2052

提起細胞培養(yǎng)中,牛血清的融化,大家首先想到的就是4℃過夜法。今天小威把上流行多年的『血清融化三步法』介紹給大家,讓你知道怎樣讓你的血清,通過合適的融化,事半功倍!

 

與4℃過夜法相比,三步法為什么對血清更好呢?重點有二!

 

其一:關(guān)系到沉淀出現(xiàn)的幾率!

 

記得嗎?血清在融化過程中,瓶子里冰塊的底部你會看見亮亮的蛋白絲在下沉,如同蜂蜜溶于水時的亮線,這就是血清中大量的蛋白在快速融化,而水的熔點高于蛋白,融化的速度是比蛋白慢的。(回想一下高級冰淇淋和大棒冰的區(qū)別,你懂得!)試想,如果采用4℃過夜的方法,1瓶500毫升的血清融化好,大約需要10小時左右,蛋白先融化,沉降在瓶子的底部,水融化的速度比蛋白慢,于是造成大量蛋白溶于少量的水,此時就很容易有一些蛋白飽和析出,(大多是脂蛋白和纖連蛋白),這就是血清融化中產(chǎn)生沉淀的重要原因之一。

 

采用三步法,只要2.5個小時,溫和有效地加快了水融化的速度,另一方面,融化過程中可以間斷輕輕搖擺瓶子,讓蛋白在瓶中混勻。此方法不但節(jié)約了時間,而且大限度減少了血清沉淀出現(xiàn)的幾率。

 

 

血清融化過程中,蛋白質(zhì)會比水先融化。冰塊底部亮亮的細絲就是融化中的蛋白

 

其二:血清在培養(yǎng)細胞中,重要的是利用它的活性的因子,因此,融化過程中大限度地保留因子的活性,就變得非常重要。回憶一下,細胞復(fù)蘇時,要保持細胞的活性,我們是要遵循“快融”原則還是“慢融”原則呢?快融!血清同樣如此!三步法需要兩個半小時,4℃過夜需要大約10個小時(冰箱一般設(shè)2-8℃,所以各實驗室融化時間會稍有出入)。哪個速度對保留活性更好?不言而喻!

 

下面,我們詳細解讀『血清的三步融化法』的步驟:

 

圖:剛從-28℃拿出的血清,是這個樣子的

 

融化血清第1步

 

  溫度:室溫

 

  時間:100ml - 35分鐘

 

  500ml - 90分鐘

 

  1000ml - 100分鐘

 

  或

 

  溫度:15-20℃水浴(新接的自來水24℃上下)

 

  時間:100ml - 5分鐘

 

      500ml - 18分鐘

 

      1000ml - 20分鐘

 

  圖:這是近Ausbian血清的大區(qū)經(jīng)理周博,在天津血研所實驗室拍到的——實驗人員三步法化血清的圖片,為了節(jié)約時間,實驗人員采取的是第步20℃水浴18min的方法。(用現(xiàn)接1的自來水放入冰凍的血清,即可達到20℃水浴的效果。一般實驗室沒有能制冷到20℃的水浴鍋)

 

  融化血清第二步

 

      溫度:20℃水?。ㄐ陆拥淖詠硭?4℃上下)

 

      時間:100ml - 15分鐘

 

      500ml - 25分鐘

 

      1000ml - 30分鐘

 

      圖:第二步,仍舊是新接的自來水浴,25min

 

  融化血清第三步

 

      溫度:37℃水浴

 

      時間:100ml - 20分鐘

 

      500ml - 35分鐘

 

      1000ml - 45分鐘

 

  第三步,將血清置于37℃水浴鍋中進行融化,大約30nmin左右,血清就*融化,可以分裝了。

 

  圖:大家看,使用三步法融化的血清十分清亮,養(yǎng)細胞的效果也是棒棒噠。

 

      注意

 

          1.在水浴過程中,血清的平面要*浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動,使血清混勻,但不要產(chǎn)生泡沫!

 

          2.胎牛血清不推薦熱滅活。

 

          3.此三步法適用于所有品牌、所有級別的進口或國產(chǎn)血清,均可讓血清在減少沉淀、保留活性、提高細胞培養(yǎng)效果方面,得到不同程度的提高!

 

  看到這里,你是不是迫不及待的想試試融化血清的三步法了呢?其實,想快速得到高品質(zhì)的血清,除了科學(xué)的融化方法,自身品質(zhì)出眾的血清,完備的運輸冷鏈,貼心的售后服務(wù),這些都是*的