實驗室一次用不完的血清會接著冷凍是否會影響血清的品質呢?其實反復凍融對蛋白的活性肯定會有一定的影響,因此,如果幾次內用不完,應盡量分裝使用。
曾有研究發(fā)現(xiàn),血清凍融三次,對腫瘤標志物的濃度影響不大1,對于血漿,有報道在短時間內反復凍融三次,對總蛋白、白蛋白和免疫球蛋白含量影響不大,但作者推測對免疫球蛋白的活性有影響2。重要的是一篇西北民族學院的文章,《反復凍融新生牛血清對促細胞生長效應的影響》,作者針對SP2/0細胞,用MEM培養(yǎng)基和三批新生牛血清進行培養(yǎng)。血清分別凍融4次至28次不等。然后繪制細胞生長曲線,根據(jù)公式t =T/A , A=log2
Y/X計算細胞倍增時間(t 為細胞倍增時間, Y 為細胞峰值前1 d 的細胞數(shù), X 為接種細胞數(shù), T 為細胞生長時間)。結果顯示:選用的三批新生牛血清在反復凍融 28 次時, 血清促細胞生長的大增殖量變化不大,均高于1×106/mL, 但是血清促細胞生長的倍增時間在反復凍融 20次時延長, 即血清促細胞繁殖一代所需的時間在凍融次數(shù)達到 20 次時顯著增加。筆者觀察了一下該文章的結果列表,發(fā)現(xiàn)在凍融20次之前,細胞倍增時間延長2-3小時不等,20次時,則延長3-4小時。可見,影響還是比較顯著的。該文章的局限是針對新生牛血清,而沒有對胎牛血清進行測試。
國外有人對大鼠血清中的18種化學成分進行了檢測,發(fā)現(xiàn)反復凍融3次對其中的14種成分沒有顯著影響,其他肌酸激酶,甘油三酯,葡萄糖,膽紅素,甚至包括氯離子有一些明顯變化,但其濃度變化控制在10%以內。3
總而言之,如果能避免牛血清的反復凍融,及時分裝,那是理想的。如果在短時間內有幾次反復凍融,也不于擔心。但是,對于胎牛血清,還有一個問題,是反復凍融增高了血清產生沉淀或渾濁的風險。因為血清在融化時,冰塊和蛋白融化的速度是不一樣的,局部可能因蛋白濃度過高而產生沉淀。同時,如果血清內含有少量纖維蛋白原,那么在低溫下也可以形成絮狀沉淀4,等到血清再融化時,沉淀就顯現(xiàn)出來了。所以,血清的質量也非常重要。