2017年,ISO出臺了一個沙門氏菌檢查的標(biāo)準(zhǔn),即ISO 6579-1-2017 食物鏈的微生物 沙門氏菌檢測計數(shù)和血清分型的水平方法。第1部分是沙門氏菌屬的檢測。該方法面向的是食品、乳與乳制品、動物飼料、動物糞便和食品加工處理的環(huán)境樣品。下面將該方法簡要描述一下:
步:預(yù)增菌。
ISO推薦的仍是緩沖蛋白胨水(簡稱BPW)(非選擇性液體培養(yǎng)基):先將BPW放置室溫。接種后,34-38℃孵育18h。如果是大量樣品(1L以上),則建議先將BPW預(yù)熱至34-38℃,再和樣品混合。ISO指出:沙門氏菌經(jīng)常小量存在,并伴隨有大量的其他腸桿菌科成員。預(yù)增菌的目的是用于能檢測到低豐度的沙門氏菌或受損傷的沙門氏菌。
第二步:選擇性增菌。
ISO推薦是兩種選擇性增菌培養(yǎng)基,同時使用。種是含大豆的RVS肉湯或MSRV瓊脂(Rappaport-Vassiliadis瓊脂),41.5℃孵育24h,第二種是MKTTn肉湯,37℃孵育24h。ISO還指出,MSRV瓊脂適合有動力的沙門氏菌,不適合無動力的沙門氏菌。
第三步:分離。
即接種到推薦的兩種選擇性固體培養(yǎng)基上。種是XLD瓊脂,37℃孵育24h以上。典型菌落為黑色中心,紅色輕微透明光暈。但有個別例外,即H2S陰性沙門氏菌變種為粉色菌落,深粉色中心;乳糖發(fā)酵陽性的沙門氏菌為黃色菌落,有或沒有黑色中心。ISO推薦再選用一個選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行分離。我們推薦HiMedia公司生產(chǎn)的顯色培養(yǎng)基HiCrome 沙門氏菌HiVeg 瓊脂(貨號MV1296)HiCrome是HiMedia顯色培養(yǎng)基的標(biāo)識,HiVeg是培養(yǎng)基無動物成分,用植物蛋白胨取代動物蛋白胨的標(biāo)識,這樣培養(yǎng)基無動物源成分帶來的瘋牛病風(fēng)險。
該顯色培養(yǎng)基建立在Rambach瓊脂基礎(chǔ)上,沙門氏菌菌落(包括腸炎沙門菌、鼠傷寒沙門菌、傷寒沙門菌)為淡紫色,有光暈,大腸桿菌為藍(lán)色菌落,奇異變形桿菌為無色菌落(見下圖)。該培養(yǎng)基特異性高,接種50-100CFU沙門氏菌,回收率≥50%。
第四步:驗證。
用生化試驗或血清學(xué)試驗驗證。使用生化鑒定試劑盒(鑒定條)則相當(dāng)方便,我們推薦HiMedia生產(chǎn)的沙門氏菌鑒定試劑盒(KB011)。該鑒定條集成了7項生化試驗和5項糖發(fā)酵試驗,可鑒定18種沙門氏菌,許多是鑒定到種。對于菌株的鑒定,則應(yīng)進(jìn)行血清學(xué)試驗。
(HiMedia生化鑒定條示意圖)
“ISO 6579-1-2017”和我國《GB 4789.4-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 沙門氏菌檢驗》相比,在增菌上和分離步驟上,都有一些不同。尤其是分離步驟進(jìn)行了簡化。因為市面上的沙門氏菌顯色培養(yǎng)基眾多,ISO只是推薦再選用一個選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行分離,而沒有明確指出是哪一類或是原理是什么。但HiMedia開發(fā)的沙門氏菌顯色培養(yǎng)基顯然是值得注意和推薦的一款,其沙門氏菌落上帶有紅色光暈,尤其容易辨識。