非發(fā)酵菌是指一群不能發(fā)酵葡萄糖或僅能以氧化形式利用葡萄糖的革蘭氏陰性桿菌。部分非發(fā)酵菌在臨床上具有致病性,為機(jī)會(huì)致病菌。近年來(lái)此類細(xì)菌從住院病人的痰、尿、血液、體液標(biāo)本中的分離率日漸增高。
分類與命名:
主要的非發(fā)酵G-桿菌屬被分成6個(gè)科:
假單胞菌科:根據(jù)rRNA-DNA同源性分為5個(gè)rRNA群
①rRNAⅠ群/假單胞菌屬;
②rRNAⅡ群/伯克霍爾德菌屬;
③rRNAⅢ群/叢毛單胞菌屬、食酸菌屬;
④rRNAⅣ群/短波毛單胞菌屬;
⑤rRNAⅤ群/窄食單胞菌屬;
⑥其它:鞘氨醇單胞菌屬、希瓦菌屬等
產(chǎn)堿桿菌科:產(chǎn)堿桿菌屬;
黃桿菌科:華麗桿菌屬
莫拉菌科:不動(dòng)桿菌屬、莫拉菌屬;
甲基球菌科;
根瘤菌科。
非發(fā)酵菌的基本鑒定要求
缺少糖發(fā)酵的證據(jù),通常是在KIA或TSI培養(yǎng)基中無(wú)酸產(chǎn)生,斜面和底部均呈紅色。
氧化酶+(不動(dòng)桿菌、嗜麥芽窄食單胞菌、唐菖蒲伯克菌、淺黃華麗單胞菌、棲稻黃素單胞菌-),但并非所有氧化酶+的G-桿菌都是非發(fā)酵菌。
麥康凱上生長(zhǎng)很差或不生長(zhǎng)。
動(dòng)力:多為+,但多為專性需氧,故半固體培養(yǎng)基中不明顯,宜用直接動(dòng)力觀察或染色法。
重要的鑒定試驗(yàn)
葡萄糖利用(O/F試驗(yàn)):O/F培養(yǎng)基:蛋白胨和糖類的比例為1:5而不同于發(fā)酵菌的1:2。
氧化酶試驗(yàn):細(xì)胞色素氧化酶的產(chǎn)生與否鑒別分類
氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性的非發(fā)酵菌主要有:假單胞菌屬、伯克霍爾德菌、無(wú)色桿菌屬、希瓦氏菌屬、 黃桿菌屬、莫拉菌屬等。
氧化酶試驗(yàn)陰性的非發(fā)酵菌主要有:不動(dòng)桿菌屬、窄食單胞菌等。
(3)動(dòng)力:半固體培養(yǎng)基:應(yīng)只穿刺培養(yǎng)基頂部4 mm,在培養(yǎng)4-6小時(shí)后觀察結(jié)果,24和48小時(shí)后再次觀察結(jié)果。更準(zhǔn)確的方法是濕片法和鞭毛染色。
(4)色素形成:非發(fā)酵菌可形成多種色素,有助于菌種的鑒定。
(5)硝酸鹽還原/產(chǎn)氣:將硝酸鹽還原成亞硝酸鹽,進(jìn)而釋放氮的生化過(guò)程。
(6)吲哚試驗(yàn):需用含色氨酸豐富的培養(yǎng)基,產(chǎn)吲哚黃桿菌、腦膜敗血黃桿菌、食酸叢毛單胞菌等。
(7)硫化氫:fu bai希瓦菌是非發(fā)酵菌中在KIA和TSI上產(chǎn)硫化氫的菌種。
非發(fā)酵菌的鑒定程序復(fù)雜并且種類繁多,締一生物為您推薦一款快速鑒定非發(fā)酵菌的產(chǎn)品——由上,HiMedia公司生產(chǎn)的HiBio-ID™微生物生化鑒定試劑卡(盒)——非發(fā)酵菌鑒定試劑盒(貨號(hào):KB019)
KB019是全面的非發(fā)酵菌標(biāo)準(zhǔn)顯色鑒定系統(tǒng)。非發(fā)酵菌屬于革蘭氏陰性,不生芽孢,多分離自臨床樣本。該試劑盒用于尿、胃腸道等臨床標(biāo)本,也可用于實(shí)驗(yàn)室已擁有的菌株鑒定。它包含12種傳統(tǒng)生化試驗(yàn)和12種糖發(fā)酵試驗(yàn),通過(guò)微生物代謝反應(yīng)導(dǎo)致培養(yǎng)基顏色變化。
該試劑盒包含兩個(gè)生化試劑卡,可一次性進(jìn)行多種生理生化實(shí)驗(yàn),主要包括的實(shí)驗(yàn)有:
鑒定卡1
1 | 吲哚試驗(yàn) |
2 | 七葉苷水解試驗(yàn) |
3 | 檸檬酸利用試驗(yàn) |
4 | 精氨酸脫羧試驗(yàn) |
5 | 硝酸鹽還原試驗(yàn) |
6 | ONPG試驗(yàn) |
7 | 堿性磷酸酶試驗(yàn) |
8 | 苯丙氨酸脫氨試驗(yàn) |
9 | 尿素酶試驗(yàn) |
10 | 溴棕*銨耐受試驗(yàn) |
11 | 賴氨酸脫羧試驗(yàn) |
12 | 氧化酶試驗(yàn) |
鑒定卡2
1 | 乳糖發(fā)酵試驗(yàn) |
2 | 麥芽糖發(fā)酵試驗(yàn) |
3 | 甘露醇發(fā)酵試驗(yàn) |
4 | 海藻糖發(fā)酵試驗(yàn) |
5 | 蔗糖發(fā)酵試驗(yàn) |
6 | 阿拉伯糖發(fā)酵試驗(yàn) |
7 | 纖維二糖發(fā)酵試驗(yàn) |
8 | 果糖發(fā)酵試驗(yàn) |
9 | 半乳糖發(fā)酵試驗(yàn) |
10 | 葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn) |
11 | 肌醇發(fā)酵試驗(yàn) |
12 | 木糖發(fā)酵試驗(yàn) |
待鑒定菌種應(yīng)先進(jìn)行分離和純化??稍跔I(yíng)養(yǎng)瓊脂(MV001/MV1274)或腦心浸膏瓊脂(MV211)上挑取一個(gè)菌落,接種在5ml腦心浸膏肉湯中,35-37℃培養(yǎng)4-6小時(shí),直到在620nm處,接種液濁度≥0.1OD或0.5 McFarland標(biāo)準(zhǔn)。 無(wú)菌打開(kāi)試劑盒,撕掉封條。每孔接種50μl上述菌液。也可用接種環(huán)劃線。35℃-37℃孵育24-48小時(shí)后,按說(shuō)明書(shū)操作。
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