副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一種嗜鹽性革蘭氏陰性無芽孢菌,它主要棲息于近海海洋和河口環(huán)境,在各類海產(chǎn)品中廣泛存在。由于海產(chǎn)品運輸和銷售造成的交叉污染,在淡水產(chǎn)品中也可被大量檢出。副溶血性弧菌的感染可導(dǎo)致人類發(fā)生多種不同的疾病,包括傷口感染、敗血癥和急性胃腸炎,常見的是引起人類的急性胃腸炎。
副溶血性弧菌之所以能導(dǎo)致人類腹瀉與致病因子有關(guān),包括病原菌初始黏附定殖宿主細胞,病原菌釋放對宿主細胞具有各種生物活性的毒素、蛋白質(zhì)、多糖等產(chǎn)物,發(fā)揮毒性作用有關(guān)。通常把產(chǎn)耐熱直接溶血素和耐熱相關(guān)溶血素毒力因子,導(dǎo)致發(fā)生感染腹瀉的菌株稱為致病株。
感染發(fā)生之初,細菌選擇性的在宿主細胞表面接觸停留并定居繁殖是活化和分泌毒素*的步驟。早期的研究發(fā)現(xiàn),副溶血性弧菌的菌毛在黏附、定殖腸道具有重要作用。無論 KP 是否陽性的臨床株通常都具有很強的粘附能力,而從海產(chǎn)品中分離出的 KP陰性菌株,其附著能力就較弱。
迄今為止,*的副溶血性弧菌重要的毒力因子就是耐熱直接溶血素(TDH)和耐熱相關(guān)溶血素(TRH),它們分別由 tdh、trh 基因編碼。調(diào)查發(fā)現(xiàn),幾乎所有臨床分離的副溶血性弧菌都產(chǎn)某種具有生物活性的蛋白:TDH 或 TRH。產(chǎn) TDH 菌株直接的表征就是在我萋血平板上出現(xiàn) β 型溶血,即神奈川現(xiàn)象陽性(KP+),這被作為菌株是否具致病性主要的標記。
食品質(zhì)檢部門檢測各類海產(chǎn)品中副溶血性弧菌的檢測,通常采用國標GB 4789.7—2013食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 副溶血性弧菌檢驗方法,包括樣品制備、增菌、分離、純培養(yǎng)、初步鑒定、確定鑒定等步驟。
分離副溶血性弧菌,可選用顯色培養(yǎng)基。顯色培養(yǎng)基是在傳統(tǒng)培養(yǎng)基制作基礎(chǔ)上,添加了新型組合式特異性發(fā)色酶底物,當細菌生長代謝過程中產(chǎn)生的特異性酶分解特異性發(fā)色底物后,目標菌形成不同顏色的菌落,從而對目標菌得到快速的分離和鑒別,同時也可以進行計數(shù)。
那么如何選擇好用的顯色培養(yǎng)基呢?締一生物推薦您使用HiMedia公司(微生物生產(chǎn)商)弧菌顯色培養(yǎng)基(貨號:MV1682)。
我們知道傳統(tǒng)使用的弧菌分離培養(yǎng)基是TCBS瓊脂,但蔗糖發(fā)酵菌會影響TCBS瓊脂上弧菌的鑒定,在HiMedia公司HiCrome弧菌顯色培養(yǎng)基上,弧菌的顯色并不受到其他細菌菌落的影響。這是因為,細菌β-半乳糖苷酶和培養(yǎng)基中所包含底物的反應(yīng)發(fā)生顯色反應(yīng),副溶血性弧菌呈藍綠色。與此同時,還可以分離出霍亂弧菌,霍亂弧菌在該培養(yǎng)基上呈紫色,且該培養(yǎng)基的成分*符合國標中對副溶血性弧菌中的顯色培養(yǎng)基的規(guī)定,主要成分如下:
在35-37℃溫育18-24小時后觀察到的培養(yǎng)特征。
有機體 | 接種(CFU) | 生長 | 恢復(fù)率 | 菌落顏色 |
糞腸球菌ATCC 29212 | ≥103 | 抑制 | 0% | |
大腸桿菌ATCC 25922 | ≥103 | 抑制 | 0% | |
金黃色葡萄球菌ATCC 25923 | ≥103 | 抑制 | 0% | |
霍亂弧菌ATCC 15748 | 50-100 | 好—旺盛 | ≥50% | 紫色 |
副溶血性弧菌ATCC 17802 | 50-100 | 好—旺盛 | ≥50% | 藍綠色 |
副溶血性弧菌引起的感染腹瀉無論是感染率還是患病人數(shù)以及對社會造成的疾病負擔大有取代沙門等傳統(tǒng)病原菌的趨勢,這是許多因素造成的綜合結(jié)果,但究其原因主要的是對副溶血性弧菌沒能引起足夠的重視,缺乏更深層次的研究和報道,包括致病機制研究,進化傳播研究,風險評估,疾病負擔以及宣傳教育等。隨著社會的發(fā)展,副溶血性弧菌的分離、檢測等操作越來越可行,這可為更深入研究副溶血性弧菌致病機制,為疫苗的開發(fā)、藥物的選擇以及行之有效的防治手段和方法提供新手段和思路。
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