雖然,雜交瘤細(xì)胞的生長依賴于外源性營養(yǎng)物質(zhì)的補(bǔ)充,如:血清、白蛋白、水解產(chǎn)物、蛋白質(zhì)等,但是,仍可應(yīng)用化學(xué)合成的TurboDoma培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)??傊?,你目前使用的培養(yǎng)基中營養(yǎng)補(bǔ)充成分越少,細(xì)胞從這種蛋白依賴型培養(yǎng)基過渡到適應(yīng)TurboDoma*無蛋白培養(yǎng)基的速度就會(huì)越快。本文締一生物/締一生物為您來分析雜交瘤培養(yǎng)基推薦使用方法。
1.通過離心過濾(380轉(zhuǎn),3分鐘)采集細(xì)胞后,加入TurboDoma培養(yǎng)基,使細(xì)胞能夠再次懸浮,且細(xì)胞密度應(yīng)達(dá)到1 x 105/ml,如:將2 x 106 細(xì)胞接種在75 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,加入20 ml TurboDoma培養(yǎng)基。如果,培養(yǎng)基的pH值低于支持細(xì)胞生長的范圍,即pH值< 7.0,培養(yǎng)基的顏色從橘紅變?yōu)榈S,這時(shí),需另加入20 ml新鮮培養(yǎng)基,使培養(yǎng)基體積增大一倍。上述情況通常在接種后3-4天出現(xiàn)。
2.注意觀察細(xì)胞生長時(shí)的狀態(tài)。細(xì)胞培養(yǎng)4-5天內(nèi),由于細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的丟失,會(huì)導(dǎo)致大量細(xì)胞的死亡。但是,仍有一些代謝活躍的細(xì)胞能夠很快適應(yīng)新的生長環(huán)境。
3.正在生長的細(xì)胞由于乳酸的產(chǎn)生會(huì)引起pH值的下降。當(dāng)培養(yǎng)基的pH值低于支持細(xì)胞生長的范圍時(shí),倒出50%的培養(yǎng)基,然后,再加入50%新鮮的培養(yǎng)基,繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。如果更換培養(yǎng)基的間隔時(shí)間越來越短,例如:細(xì)胞表現(xiàn)出旺盛的代謝能力,那么,就可增加新鮮培養(yǎng)基的量,直至將剩余的培養(yǎng)基全部換為新的培養(yǎng)基。
4.為了細(xì)胞增殖能夠達(dá)到滿意的效果,必須保證培養(yǎng)過程中使用相同的培養(yǎng)瓶。而且,我們建議:在細(xì)胞適應(yīng)TurboDoma培養(yǎng)基的過程中,要頻繁地更換培養(yǎng)液,不要急于傳代。細(xì)胞需要逐漸適應(yīng)新的培養(yǎng)環(huán)境。
5.懸浮細(xì)胞生長時(shí),zui初,可能會(huì)形成50個(gè)細(xì)胞左右的細(xì)胞團(tuán),大小不一。漸漸地,細(xì)胞團(tuán)慢慢消失,細(xì)胞逐漸擴(kuò)散增殖。對(duì)于懸浮細(xì)胞的傳代培養(yǎng),可通過稀釋培養(yǎng)液或加入新鮮培養(yǎng)基來進(jìn)行。
注意:細(xì)胞培養(yǎng)過程中,為了能夠使細(xì)胞在24小時(shí)內(nèi)進(jìn)入正常生長周期,必須等細(xì)胞生長密度達(dá)到一定程度時(shí)才可分瓶,進(jìn)行傳代培養(yǎng)!
綜上所述,您是不是已經(jīng)對(duì)雜交瘤培養(yǎng)基推薦使用方法,有所了解。如果還有其他疑問,請咨詢締一生物/締一生物資深專家。