當(dāng)我們?cè)陴B(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候,有可能會(huì)出現(xiàn)如下的狀況:細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢、細(xì)胞變形、碎片增加、懸浮細(xì)胞容易成團(tuán)、培養(yǎng)基提前變色、鏡下發(fā)現(xiàn)有小黑點(diǎn)。本文締一生物/締一生物為您分析目前普遍使用的支原體檢測(cè)方法有幾種?
1、支原體的分離培養(yǎng)
它是支原體污染鑒定的金標(biāo)準(zhǔn),準(zhǔn)確,價(jià)格便宜。但支原體在分離培養(yǎng)的過程中,要長(zhǎng)出明顯克隆至少需要4周時(shí)間,所需時(shí)間較長(zhǎng)。
2、ELISA方法
檢測(cè)步驟復(fù)雜,出現(xiàn)誤差的幾率較高,對(duì)實(shí)驗(yàn)者操作技巧有要求。同時(shí)試劑盒成本較高,普遍不被選用。
3、DNA熒光染色法
它采用熒光染色劑Hoechst 33258和支原體DNA富含A-T的區(qū)域結(jié)合。價(jià)格適中。由于DNA檢測(cè)需要將可疑樣品與指示細(xì)胞共同培養(yǎng),因此一般需要幾天后才出結(jié)果。有假陽(yáng)性和假陰性,需要與其他方法結(jié)合使用。
4、PCR技術(shù)
它根據(jù)支原體核糖體16s-23s rRNA的特異保守序列設(shè)計(jì)引物,對(duì)待檢樣本DNA進(jìn)行擴(kuò)增,通過對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的大小分析作出診斷。操作簡(jiǎn)單、速度快,只需2-3小時(shí)即可出結(jié)果,通量高,價(jià)格適中。但是,不同廠家生產(chǎn)的PCR檢測(cè)試劑盒由于引物及內(nèi)在設(shè)計(jì)的不同,其準(zhǔn)確度和敏感度有天壤之別。
目前,被各大實(shí)驗(yàn)室及生物藥廠普遍選用的是德國(guó)Minerva Biolabs公司開發(fā)生產(chǎn)的支原體PCR檢測(cè)試劑盒。試劑盒在267bp的條帶,涵蓋了歐洲《藥典》中zui易感染細(xì)胞的26種支原體亞型,保證了其*的敏感度;通過內(nèi)控條帶的設(shè)計(jì),防止了假陰性的發(fā)生。我國(guó)農(nóng)業(yè)部在2008年豬藍(lán)耳病疫苗研制的重點(diǎn)項(xiàng)目中,實(shí)驗(yàn)者用此檢測(cè)法與培養(yǎng)法做了超過100次的平行比對(duì)實(shí)驗(yàn),結(jié)果全部一致,假陽(yáng)性率和假陰性率為零。
因此,用PCR方法檢測(cè)支原體,其準(zhǔn)確性與選擇的試劑盒的質(zhì)量有直接相關(guān)性。
綜上所述,您是不是已經(jīng)對(duì)目前普遍使用的支原體檢測(cè)方法有幾種,有所了解。如果還有其他疑問,請(qǐng)咨詢締一生物/締一生物資深專家。