生長促進曲線的測定,是反映胎牛血清(FBS)功能的方法之一。下面締一生物/締一生物專家根據(jù)美國藥典的方法,簡要描述一下美國藥典關于FBS生長促進曲線的規(guī)定。
細胞生長速率的測定經(jīng)常用于確定細胞對外源刺激的反應。定量評估細胞的生長狀況是用于監(jiān)測培養(yǎng)條件一致性的重要方法。細胞傳代的*濃度,*接種密度和倍增時間都是可被量化的指標,并可用于觀察趨勢。因此,了解細胞的生長動力學對于設計細胞生物學實驗非常重要。而細胞生長狀況在潛伏期、對數(shù)期和平臺期都存在不確定性,在這三個生長階段記錄細胞生長狀況,可用于確定細胞群體倍增時間和細胞周期。細胞進入平臺期后可能降低生長速率和改變形態(tài),發(fā)生極化和分泌更多的細胞外基質(zhì),使得細胞很難從基質(zhì)上分離下來,細胞在對數(shù)期后期的產(chǎn)量zui高,可重復性。
前期細胞接種方法,請見文章《如何準備用于生長促進曲線測定的細胞》。
測定生長促進曲線,需在第0,1,2,3,4,7天進行活細胞計數(shù)。
計算平均的活細胞數(shù)(貼壁cell/cm2或懸浮細胞/ml)和活力細胞百分比。用半對數(shù)坐標制圖,活細胞數(shù)對數(shù)在Y軸,時間(天)在X軸。利用跨過3個或3個以上時間點的線性生長曲線計算倍增時間。
要計算可靠的倍增時間,截取的生長曲線線性值R2應≥0.98。待測樣本的倍增時間應不少于美國藥典FBS參考標準品的90%。
綜上所述,您是不是已經(jīng)對美國藥典關于FBS生長促進曲線的規(guī)定,有所了解。如果還有其他疑問,請咨詢締一生物/締一生物資深專家。